高效毛细管电泳法测定注射用头孢他啶的含量伊春

高效毛细管电泳法测定注射用头孢他啶的含量

高效毛细管电泳法测定注射用头孢他啶的含量 2011年12月04日 来源： [摘要]目的用HPCE测定注射用头孢他啶的含量。方法高效毛细管电泳法，有效毛细管长度60cm×内径75μm；硼砂缓冲液25mmol/L (pH8．2)，高压进样5s，分离电压20KV，温度为25℃，检测波长为254nm，头孢曲松为内标。结果头孢他啶在4～20μg/ml 浓度范围内线性关系良好(r=0．999 7)，平均回收率为98．96％(n=5，RSD =1．74％)。结论本法简单、快捷、灵敏。[关键词]头孢他啶；高效毛细管电泳法 头孢他啶属第三代头孢类抗生素，具有抗菌谱广、抗菌作用强的特点。对多种β-内酰胺酶有抵抗力，临床广泛应用于各种单纯及混合感染。目前测定头孢他啶含量较成熟的方法有HPLC法。高效毛细管电泳(HPCE)是近年来发展迅速的一种新的分离分析技术。与传统的分离分析手段相比较，具有高效、快速、微量和易于自动化等优势。HPCE分析抗生素的研究正引起人们的关注。高效毛细管电泳测定头孢他啶的含量国内未见报道。本文建立了用HPCE法测定头孢他啶含量的方法，此方法采用内标法测定简便灵敏、结果可靠，重现性好，能满足头孢他啶的药品质量监控。1 仪器与试药 高效毛细管电泳仪，石英毛细管柱(60cm×75／μm)(均为美国Waters公司产品)；Milennimn32数据处理系统；头孢他啶标准品(中国药品生物制品检定所)；头孢曲松标准品(中国药品生物制品检定所)；注射用头孢他啶(广州白云山制药股份有限公司，批号030407、030414、030509、030520、030605)；硼砂、氢氧化钠均为分析纯。2 方法与结果2．1 缓冲液的配制 精密称取4．78g硼砂溶于500ml水中，配成25mmol/L 硼砂电泳缓冲液溶液，磷酸调DH为8．2。2．2 电泳操作条件分离电压：20KV；检测波长：254nm；进样量：50kPa×5s；缓冲液：25mmol/L 硼砂溶液(pH8．2)。每次进样前用缓冲液冲洗毛细管柱10rain，每次分析后用0．1mol/L 的氢氧化钠溶液冲洗2min，水冲洗10min。所用溶液均经0．45μm滤膜滤过。上述电泳条件，得电泳图。2．3 标准品溶液和内标溶液的配制 精密称取头孢他啶标准品10．0mg，置于100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，配成0．1mg/ml 的头孢他啶标准品溶液。精密称取头孢曲松标准品20．0rng置于100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。吸取上述溶液5ml置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成头孢曲松40μg·/ml 的内标溶液。2．4 线性关系考察 精密吸取头孢他啶标准品溶液2、4、6、8、l0ml置于50ml量瓶中，分别加内标溶液5ml，用水稀释至刻度，摇匀，按上述电泳条件，分别进样5s，以标准品浓度(μg/ml )为横坐标(C)，头孢他啶主峰面积与内标峰面积比为纵坐标(A)作图，回归方程为：A=0．248 C 一0．078，r =0．999 7，n =5头孢他啶在4～20μg/ml 浓度范围内线性关系良好。2．5 精密度试验 精密吸取头孢他啶标准品溶液2ml和内标溶液5ml置于50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。按上述电泳条件，重复进样5次，测得头孢他啶峰面积的RSD为1．82％ ，表明仪器精密度良好。2．6 稳定性试验 将同一标准品溶液在相同电泳条件下，分别于0、1、2、3、4h重复进样5次，测得头孢他啶峰面积的RSD为1．89％ ，表明头孢他啶在4h内测定结果稳定。2．7 重复性试验 按样品测定项下方法，对同一批号样品，分别取样平行测定5次，求得含量的相对标准偏差RSD为2．01％ ，表明重复性较好。2．8 加样回收率试验 按照2．4项的方法配制10、20、30μg·ml 三个已知浓度的样品与内标的混合溶液，加入头孢他啶标准品溶液进行测定，以头孢他啶峰面积与内标峰面积比代入回归方程计算回收率。2．9 样品测定 取注射用头孢他啶5批，精密称取适量置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精密吸取该溶液lml置于25ml量瓶中，加入内标溶液2ml，用超纯水稀释至刻度，摇匀。进样，内标法计算5批样品的含量并与I-IPLC法测定的结果相比较，结果表明两种方法测定的结果之间无显著性差异。3 讨论3．1 由于头孢他啶溶液呈酸性，宜选用碱性缓冲液。本实验在对不同缓冲液进行的实验中，发现硼砂对头孢他啶的分离最理想。研究表明缓冲液浓度和pH值对分离具有重要影响。高浓度缓冲液可获得较好的分离，但保留时间会变长，而且，导致通过毛细管的电流增加，从而增大焦耳热。因此，我们选用25mmol/L 硼砂作缓冲液。pH值选择是决定分离成败的关键。采用pH8．2的硼砂缓冲液时分析时间短，峰形尖锐、对称并达到基线分离。3．2 研究表明，柱温降低分离度变好，但柱效降低，分析时间变长。综合考虑分离度和迁移行为的变化，本实验选用25℃柱温较合适。分离电压是毛细管电泳的一项重要参数，实验表明，增加组分的迁移速度是减少谱带展宽、提高分离效率的重要途径，增加电场强度可以达到提高速度的目的。但高场强度导致通过毛细管的电流增加，从而增大焦耳热。在20KV时，分离选择性最佳。3．3 由于吡啶是头孢他啶合成过程的原敷料，又是降解过程中的降解产物，对人体有一定的毒副作用。因此，在测定中一定要注意低温和避光保存，以防其分解。3．4 本实验对HPLC和HPCE的测定结果进行了比较，两种方法测定的结果无显著性差异。HPLC法与HPCE法相比，具有消耗成本高、分析时间长、有机溶剂用量大等缺点。我们利用高效毛细管电泳法测定头孢他啶的含量，方法简便、准确、快速、重复性好，可为头孢他啶的质量控制提供一种简便的方法。

参考文献：[1] 国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)[s]．北京：化学工业出版社，2000．172[2] 彭军，任耘，孙悦．高效液相色谱法测定头孢他啶注射剂的含量[J]．中国医院药学杂志，2001，21(10)：600[3] 石瑛，牛彦，吴美红．高效液相色谱测定注射用头孢他啶有关物质[J]．广东药学，2001，l1(6)：21[4]Flurer C L．Analysis of antibiotics by c印illary electrophoresis[J]．Electropho—resis，1997，18(12—13)：2427

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